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[药物试验] 浅析乳酸脱氢酶在药物活性测试上的作用

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  • 2018-7-26 15:32
  • medicilon 发表于 2019-10-9 09:35:25 | 显示全部楼层 |阅读模式
    细胞凋亡或者坏死会造成细胞膜结构的破坏,然后会导致细胞浆内的酶释放到培养液里,这些酶包括较为稳定的乳酸脱氢酶。乳酸脱氢酶从细胞内被释放到培养基中,可以形成一个可视化的颜色反应,通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH活性,可以对药物的细胞毒性进行定量分析,因此可以将乳酸脱氢酶用于药物活性测试,并以此来分析化合物或环境因素对细胞死亡的作用。

    存在与所有动物组织中的乳酸脱氢酶(LDH),是糖酵解过程中的关键酶,催化乳酸与丙酮酸之间的互变反应。糖酵解至丙酮酸时,在缺氧条件下,由丙酮酸变为乳酸。在有氧条件下,则由乳酸变为丙酮酸,从而进入三羧酸循环。LDH在肝脏中的活性最高,其次为心脏、骨骼肌、肾脏,而且在肿瘤组织及白血病细胞中也能检测得到。在药物活性测试研究上,可以通过检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性来测定药物的细胞毒性。美迪西拥有先进的仪器设备,尖端的技术和经验丰富的科研团队,可以提供全方位的药物分析服务,包括方法开发和方法验证,分析测试与放行,稳定性研究,大规模分离和CMC申报文件服务。

    1、乳酸脱氢酶可以用于测定自然杀伤细胞的活性

    参与免疫反应的淋巴样细胞也成为自然杀伤细胞,这些细胞可以杀伤肿瘤细胞、发生致癌转化的细胞和活体内其他不正常的细胞。研究一种药物对自然杀伤细胞的数量及活性影响,可以采用乳酸脱氢酶释放法来测定自然杀伤细胞的活性。

    在正常情况下,LDH不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中。释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形成有色的甲簪类化合物,在490nm或570nm波长处有一高吸收峰,利用读取的OD值,经过计算即可得自然杀伤细胞的活性。

    2、乳酸脱氢酶可以测定细胞毒性

    作为一种具有独特优势的生物靶向治疗药物,抗体药物以其高度特异性及优越的药代动力学特性,成为了全球药物研发的热点之一,长期以来也被视为最有发展前途的有效的人类疾病治疗药物种类之一。在进行抗体药物研发时需要进行细胞毒性检测,基于细胞毒性的抗体类药物活性测试的方法,可以考察药物对细胞内部的影响。乳酸脱氢酶是一种存在于所有细胞类型中的稳定的酶,在质膜损伤后会迅速释放到细胞培养基中,因此它是细胞毒性研究中使用最为广泛的标记物,可以用于抗体治疗药物活性测试。

    3、乳酸脱氢酶活性可以检测恶性疟原虫药物的疗效

    乳酸脱氢酶还可以用于治疗恶性疟原虫药物活性测试,有研究者探讨了疟原虫乳酸脱氢酶活性与原虫密度、培养时间的关系,以及在监测药物疗效等方面的作用[1]。方法利用酶比色法对不同原虫密度、不同培养时间以及药物治疗前后患者的血样进行pLDH活性检测。

    结果pLDH的活性随恶性疟原虫感染率的提高、培养时间的增加而明显地升高,最大活性是在虫体培养36~48h之间,虫体主要处在裂殖体期和滋养体期;混合感染(恶性疟原虫和间日疟原虫)患者经药物治疗后血液中pLDH活性明显降低,治疗5d后已检测不到pLDH的活性。结论pLDH活性检测对于疟原虫克隆株鉴定、药物的疗效监测等方面具有一定的应用价值。

    乳酸脱氢酶不仅可以用于药物活性测试,还具有一些临床意义。倘若器官或者组织损伤,乳酸脱氢酶会释放到血液中,血清中此酶的含量就会增高。总之从分子水平上研究乳酸脱氢酶的酶学特性、免疫活性以及药物对其活性影响,具有重要意义。

    [1] 恶性疟原虫乳酸脱氢酶活性测定及在药物疗效监测方面的初步观察[J].

    临床药师网,伴你一起成长!微信公众号:clinphar2007

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    cry
    还木有人打赏~

  • 昨天 08:49
  • 黄师傅 发表于 2019-10-9 09:45:43 | 显示全部楼层
    谢谢分享!
    临床药师网,伴你一起成长!微信公众号:clinphar2007
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  • 9 小时前
  • panjing111 发表于 2019-10-9 14:46:24 | 显示全部楼层
    谢谢分享!
    临床药师网,伴你一起成长!微信公众号:clinphar2007
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