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[药物试验] Ames试验的类型有哪些

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开心的小猫 发表于 2020-2-20 09:24:24 | 显示全部楼层 |阅读模式
Ames试验是由由美国加利福利亚大学伯克利分校生化系B.N.Ames教授实验室在1975年建立的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,从建立到后来的不断完善,现在Ames试验被广泛应用于化合物的致突变性和潜在致癌性的初筛检验。为了对Ames试验有更多的了解,特收集整理了网上的资料,对Ames试验的类型进行了盘点。

Ames试验是利用鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸 (histidine)营养缺陷型突变株发生回复突变的性质,对化学物质致突变性进行初步筛选的短期体外试验方法。在GLP试验用标准Ames试验,而在药物筛选早期常用的试验有Mini-Ames试验、Micro-Ames试验、AmesII试验等,特点是用药量少。可检测基因突变的Ames试验与检测DNA损伤的体外彗星试验,考察染色体异常的体外微核试验等结合在一起,评价化合物的体外遗传毒性,探讨毒性作用机制,为该化合物毒性的防治提供理论依据。美迪西建立了符合国际标准的药物安全评价体系,实验研究遵循ICH、CFDA、FDA和OECD指导原则,可为客户提供高质量的数据、快速的研究周期的临床前药物安全性评价服务。

1、Mini-Ames试验

通过收集整理网上的资料得到了Mini-Ames试验的一些资料。Mini-Ames试验即微型的Ames试验,试验方法同标准Ames试验相同,可以用于药物的早期开发和筛选,是一种对于药物的遗传毒理的检测比较可靠的方法。与标准Ames试验的100mm细胞培养皿相比,Mini-Ames试验用六孔细胞培养板板替代平皿。Mini-Ames试验的实验为一周,周期短,供试品需求量和试剂耗材少,用量约为Ames试验的20%。而且Mini-Ames试验筛选效率高,可以在同一实验方案中同时筛选多个供试品。

2、Micro-Ames试验

Mini Ames试验或者Micro Ames试验通常选择2个菌株(即TA98和TA100,可检测98%致突变剂),为了消除另外2%的可能性,可选择与标准Ames试验相同的5个菌株。

3、AmesII试验

AmesII试验又称为Ames波动试验,由Gee等通过开发新的菌株,并改进传统Ames试验方法,开发出的新的Ames试验。在实验方法上,AmesII试验采用了液态微孔板培养方法,摒弃了试验所用的固态琼脂平板培养方法。即在微孔板中进行受试物和菌株的孵育,利用培养基中的特殊指示剂溴甲酚紫,当孔中有回复突变的菌株生长,使培养基pH值降低时,该指示剂由紫色变为黄色。利用酶标仪在特定波长进行扫描,可记录培养基为黄色孔的数量,也即反应出受试物的致突变性。全过程可以全自动由机器完成,真正实现了高通量化。

AmesII试验使用菌株TA98和混合菌株TA7001至7006,将细菌与受试物预培养及一系列稀释后,在30℃培养过夜,然后接种到各有选择性试剂5-FU及pH敏感剂溴甲酚紫的384孔上,通过紫外分光光度计检测培养基变黄的程度来判断受试物致突变性。

不同类型的Ames试验其优缺点不同,可能需要改进和完善的还有很多。但随着科学技术尤其是分子生物学领域的快速发展,遗传毒性早期快速评价方法也在不断发展和完善中,为药物研发提供了很多的助力。
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